其他研究

大蒜素是强效抗氧化剂，目前国内外研究显示它能增强肝脏谷胱甘肽抗氧化系统功能，能拮抗乙醇氧化性肝损伤。本研究通过对肝脏病理学、超微结构、细胞外基质与肝纤维化相关指标的观测研究大蒜素对肝纤维化的防治作用。

材料方法

1、材料：

SD大鼠46只，雌雄兼用，体重220-260g，由苏州大学实验动物中心提供。大蒜素微粒：江苏省靖江制药厂提供，批号：2001011.2。秋水仙碱：昆明制药有限公司，批号：980732，规格：0.5mg/片。二甲基亚硝胺(DMN)：上海开明化学厂生产化学纯，批号：0161072。酶联免疫检测试剂盒等均由上海森雄科技实业有限公司提供。

2、仪器：

①透视电子显微镜CH600，日本Hitachi。②酶标仪：Denley Dragon Wellscan MKI芬兰Lab systems提供。

3、方法

①动物分组：正常对照组(n=6)：予蒸馏水灌胃，生理盐水腹腔注射；模型组(n=8)：蒸馏水，DMN；小剂量大蒜素预防组(n=8)：予大蒜素11mg·kg-1·d-1，DMN；中剂量大蒜素预防组(n=8)：予大蒜素22mg·kg-1·d-1，DMN；中剂量大蒜素治疗组(n=8)：予大蒜素22mg·kg-1．d-1，DMN；秋水仙碱组(n=8)：予秋水仙碱0.15mg·kg-1．d-1，DMN。给药方法：用生理盐水将DMN配成0．5%的溶液10mg·kg-1·次-l腹腔注射，第1周每天1次，连续3d，第2～4周每周1次，第5、6周均每天1次，连续2d，实验结束后腹主动脉取血制备血清。采血后取肝脏左叶常规固定备用。将大蒜素用蒸馏水分别配成相应浓度，按10m1·kg-1．次-1灌胃给药。除大蒜素中剂量治疗组在模型建立3周后给药，余各组在建模开始时同时给药。②观测指标及方法：检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)，天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白，I型前胶原肽(PINP)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)和透明质酸(HA)检测采用双抗体夹心ABC-ELISA法。层粘连蛋白(LN)检测采用酶联免疫竞争法。肝组织HE染色及胶原纤维(V-G)、网状纤维特殊染色(Gommori)。

结果

1、大蒜素对大鼠肝纤维化模型肝功能影响：模型组血清AST和ALT活性明显增加，分别为正常对照组的1.7倍(p<；0.01)和1.5倍(p<；0.01)。大蒜素抑制DMN所致的上述改变，可使血清AST和ALT活性完全恢复正常，并能提高血清白蛋白含量，而秋水仙碱则无降低AST、ALT及升高血清白蛋白含量作用(p>；0.05)。

2、大蒜素对大鼠血清纤维化指标的影响：模型组LN、HA、P工NP、PⅢNP较正常组明显增加(p<；0.05)，大蒜素小、中剂量预防组、中剂量治疗组LN、PINP、PⅢNP较模型组明显下降(p<；0.05)，其中大蒜素中剂量预防组对降低HA、LN、PINP、PⅢNP作用最大。秋水仙碱组仅对LN、PⅢNP减少作用显著。

3、大蒜素对肝组织病理学影响：HE染色、Gommori、V-G染色均显示大蒜素预防和治疗组与模型组相比，可明显减轻纤维化等级及SSS分值。

4、光镜结果：正常组：肝小叶内网状纤维支架完整，分布规则，无胶原纤维存在。模型组：肝细胞变性坏死，肝小叶结构破坏，纤维组织增生，假小叶形成。大蒜素组：中央静脉周围可见纤维组织，未见明显假小叶形成。

5、电镜结果：模型组肝细胞萎缩， 线粒体固缩或肿胀，细胞内见大量脂滴及空泡样变，小胆管扩张，胆管上皮增生，微绒毛减少。Disse间隙见多处纤维沉积，肝窦内皮细胞的窗孔消失，内皮细胞下基底膜形成。大蒜素组Disse间隙纤维化明显减轻，其中中剂量大蒜素组接近正常。

讨论

研究发现大蒜素对四氯化碳诱发大鼠肝损伤引起的AST和脂质过氧化产物丙二醛水平的升高有明显的抑制作用，这种作用具有剂量效应关系。

血清LN、HA、PINP、PⅢNP是检测肝纤维化可靠的血清学指标。其中LN、PⅢNP在肝纤维化过程早期出现，常与肝细胞的炎症坏死有关，尤其是LN参与形成肝窦内皮细胞基底膜。而HA、PINP在肝纤维化过程晚期出现，可作为衡量药物抗肝纤维化效应指标。本组结果示大蒜素各组PINP、PⅢNP、LN均低于模型组，表明其肝内合成纤维受到抑制，肝组织学显示大蒜素可降低肝纤维化等级及SSS分值。其中以中剂量预防组效果最好，电镜观察同样显示大蒜素各防治组Disse间隙及肝窦纤维沉积及抑制内皮细胞基底膜形成较模型组明显好转。提示大蒜素对实验性肝纤维化具有一定的预防和治疗作用。

大蒜素抗实验性肝纤维化的可能机制为：①大蒜素具有良好的抗氧化作用。肝细胞损伤可产生脂质过氧化产物如丙二醛等激活肝星状细胞(HSC)合成胶原。抗氧化治疗有利于减轻肝损伤和肝纤维化。本实验在DMN造模大鼠中观察到肝功能改善，提示大蒜素可通过抑制脂质过氧化而对肝损伤及纤维化起抑制作用。②间接抑制HSC细胞转化。HSC在肝受损时被激活，转化成肌成纤维细胞(MFBLC)。

研究认为，大蒜素由于其抗脂质过氧化(LPO)作用使血管内前列腺素(PG)I：明显增加，PGI：能抑制血小板衍生生长因子(PDGF)激活的DNA合成而抑制血管平滑肌细胞增殖。大蒜素可能通过抑制PDGF激活的DNA合成而抑制HSC的增殖。③大蒜素还能提高纤维蛋白自溶解活性，从而使纤维蛋白降解产物(FDP)增加。本组设立治疗组，在肝纤维化造模3周后给药，结果表明大蒜素治疗组肝脏病理组织学检查及胶原蛋白含量与肝纤维化模型组差异有显著性，说明大蒜素可能具有促进胶原蛋白降解与胶原纤维重吸收的作用。